直链淀粉测定试剂盒（微量法）

需自备的仪器和用品：                                                 

酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研钵、冰、乙醚和蒸馏水。

试剂的组成和配制：                                                   

试剂一：液体100mL×1瓶；4℃保存；

试剂二：乙醚100mL×1瓶；(自备)

试剂三：液体100mL×1瓶；4℃保存；

试剂四：液体2mL×1瓶；4℃保存；

试剂五：液体300uL×1瓶；4℃保存；

淀粉提取：                                                            

称取0.01~0.02g烘干样本（建议称取约0.01g）于研钵中研碎，加入1mL试剂一，充分匀浆后转移到EP管中，80℃水浴提取30min，3000g，25℃离心5min，弃上清，留沉淀，加入1mL试剂二（乙醚）振荡5min，3000g，25℃离心5min，弃上清，留沉淀，加入1mL试剂三充分溶解，90℃水浴10min，冷却后待测。

测定步骤：                                                             

1、  分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至620nm，蒸馏水调零。

测定管：在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20μL样本， 14μL试剂四，120μL蒸馏水，2μL试剂五，44uL蒸馏水，混匀，测定620nm处吸光值，记为A测定。

空白管：在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20μL试剂三， 14μL试剂四，120μL蒸馏水，2μL试剂五，44μL蒸馏水，混匀，测定620nm处吸光值，记为A空白。

直链淀粉含量计算：                                                   

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y=1.755x+0.0062；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。

1、按照蛋白浓度计算

直链淀粉含量(mg/mg prot)=[(A测定-A空白-0.0062)×V1]÷1.755 ÷(V1×Cpr)=0.57×(A测定-A空白-0.0062) ÷Cpr

2、按样本干重计算

直链淀粉含量(mg/g干重)= [(A测定-A空白-0.0062)×V1] ÷1.755÷(W×V1÷V2) =0.57×(A测定-A空白-0.0062) ÷W

V1：加入反应体系中样本体积，0.02mL；V2：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y= 0.8775x+0.0062；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。

1、按照蛋白浓度计算

直链淀粉含量(mg/mg prot)=[(A测定-A空白-0.0062)×V1]÷0.8775 ÷(V1×Cpr)=1.14×(A测定-A空白-0.0062) ÷Cpr

2、按样本干重计算

直链淀粉含量(mg/g干重)= [(A测定-A空白-0.0062)×V1] ÷0.8775/(W×V1÷V2) =1.14×(A测定-A空白-0.0062) ÷W

V1：加入反应体系中样本体积，0.02mL；V2：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g

最低检测限为1mg/g干重或10μg/mgprot。