支链淀粉测定试剂盒（微量法）

需自备的仪器和用品：                                                 

酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研钵、冰、乙醚和蒸馏水。

试剂的组成和配制：                                                      

试剂一：液体100mL×1瓶；4℃保存；

试剂二：乙醚100mL×1瓶；4℃保存；(自备)

试剂三：液体100mL×1瓶；4℃保存；

试剂四：液体2mL×1瓶; 4℃保存；

试剂五：液体300uL×1瓶; 4℃保存；

淀粉提取：                                                            

称取0.01~0.02g烘干样本（建议称取约0.01g）于研钵中研碎，加入1mL试剂一，充分匀浆后转移到EP管中，80℃水浴提取30min，3000g，25℃离心5min，弃上清，留沉淀，加入1mL试剂二（乙醚）振荡5min，3000g，25℃离心5min，弃上清，留沉淀，加入1mL试剂三充分溶解，90℃水浴10min，冷却后待测。

测定步骤：                                                           

1、  分光光度计或酶标仪预热30min以上，蒸馏水调零。

测定管：在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20uL样本， 14uL试剂四，120uL蒸馏水，2uL试剂五，44uL蒸馏水，混匀，分别测定550和743nm处吸光值，ΔA测定=A550-A743。

空白管：在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20uL试剂三， 14uL试剂四，120uL蒸馏水，2uL试剂五，44uL蒸馏水，混匀，分别测定550和743nm处吸光值，ΔA空白=A550-A743。

支链淀粉含量计算：                                                    

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y=0.1214x+0.0076；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。

1、按照蛋白浓度计算

支链淀粉含量(mg/mg prot)=[(ΔA测定-ΔA空白-0.0076)×V1]÷0.1214 ÷(V1×Cpr)=8.24×(ΔA测定-ΔA空白-0.0076) ÷Cpr

2、按样本干重计算

支链淀粉含量(mg/g干重)= [(ΔA测定-ΔA空白-0.0076)×V1] ÷0.1214÷(W×V1÷V2) =8.24×(ΔA测定-ΔA空白-0.0076) ÷W

V1：加入反应体系中样本体积，0.02mL；V2：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y= 0.0607x+0.0076；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。

1、按照蛋白浓度计算

支链淀粉含量(mg/mg prot)=[(ΔA测定-ΔA空白-0.0076)×V1]÷0.0607 ÷(V1×Cpr)=16.47×(ΔA测定-ΔA空白-0.0076) ÷Cpr

2、按样本干重计算

支链淀粉含量(mg/g干重)= [(ΔA测定-ΔA空白-0.0076)×V1] ÷0.0607÷(W×V1÷V2) =16.47×(ΔA测定-ΔA空白-0.0076) ÷W

V1：加入反应体系中样本体积，0.02mL；V2：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g

最低检测限为10mg/g干重或0.1mg/mgprot。