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人Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)ELISA Kit/Human Collagen Type Ⅰ,Col Ⅰ ELISA Kit

BPE10382 Catalogue No.
48/96T
1380.00-2580.00
4-640ng/ml
Human Collagen Type Ⅰ,Col Ⅰ ELISA Kit
批间差:CV<12%
批内差:CV<8%

胶原蛋白是生物高分子,动物结缔组织中的主要成分,也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白,占蛋白质总量的25%~30%,某些生物体甚至高达80%以上。
畜禽源动物组织是人们获取天然胶原蛋白及其胶原肽的主要途径,但由于相关畜类疾病和某些宗教信仰限制了人们对陆生哺乳动物胶原蛋白及其制品的使用,现今正在逐步转向海洋生物中开发。欧洲食品安全局(EFSA)已证实了即使是动物骨骼来源的胶原蛋白也不存在感染疯牛病和其它相关疾病的可能。
由于氨基酸组成和交联度等方面的差异,使得水产动物尤其是其加工废弃物——皮、骨、鳞中所含有的丰富的胶原蛋白具有很多牲畜胶原蛋白所没有的优点,另外来源于海洋动物的胶原蛋白在一些方面明显优于陆生动物的胶原蛋白,比如具有低抗原性、低过敏性等特性。因此水产胶原蛋白可能逐步替代陆生动物胶原蛋白。
胶原蛋白种类较多,常见类型为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅴ型和Ⅺ型。
I型胶原蛋白是人体中最丰富的胶原蛋白。它形成大的嗜酸性纤维,称为胶原纤维。它存在于疤痕组织,最终产品时组织愈合通过修复、以及腱、韧带、所述内膜的肌原纤维的有机部分骨,所述真皮中、牙质和器官胶囊。

1.实验原理:

本试剂盒采用竞争法检测样本中Ⅰ型胶原(Collagen Type Ⅰ,Col Ⅰ)的含量。向预先包被了抗体的酶标孔中加入样本,再加入生物素标记的识别抗原,在37℃下孵育30min,两者与固相抗体竞争结合形成免疫复合物,经PBST洗涤除去未结合的生物素抗原,然后加入亲和素-HRP,在37℃下孵育30min,亲和素-HRP与生物素抗原结合,洗涤后结合的HRP催化TMB(四甲基联苯胺)成蓝色,随后在酸的作用下转化成黄色,在450nm波长下有吸收峰,吸光值与样本中抗原的浓度成负相关

2.试剂盒组成:

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1份

1份


封板膜

2片(48)

2片(96)


密封袋

1个

1个


酶标包被板

1×48

1×96

长期-20℃

标准品(冻干粉)

2支(定容至150μl)

2支(定容至150μl)

2-8℃

标准品/样品稀释液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃

生物素抗原(冻干粉)

1支(稀释到3ml)

1支(稀释到6ml)

长期-20℃

亲和素-HRP(浓缩液)

50μl(稀释到3ml)

100μl (稀释到6ml)

长期-20℃

生物素抗原稀释液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃

亲和素-HRP稀释液

2.95ml×1瓶

5.9ml×1瓶

2-8℃

显色剂A液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃

显色剂B液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃

终止液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃

浓缩洗涤液

(20ml*25倍)×1瓶

(20ml*25倍)×1瓶

2-8℃

备注:

1)   试剂盒中“标准品/样品稀释液”为超纯水(可用双蒸水替代),“终止液”为2M的H2SO4,洗涤液为含0.15%吐温-20的PBST,如不够可自行配制。

2) 不同公司的缓冲体系存在较大差异,请勿将本试剂盒的试剂与其他公司的试剂混用以免影响实验结果。

3)  浓缩洗涤液在低温下会有少量盐类析出,稍微加温后即会消失,不影响使用。

4)   浓缩生物素抗原和浓缩亲和素-HRP稀释前务必先离心同时应避免反复冻融

3.需要而未提供的试剂和器材

1)  37℃恒温箱。

2)  标准规格酶标仪。

3)  精密移液器及一次性吸头

4)  双蒸水或超纯水

5)  干净的试管或Eppendof管

6)  吸水纸

7)  自动洗板机或8道排枪

8)  ELISA数据处理软件,推荐使用ELISACalc

       9)  500ml烧杯的和适当量程的量筒

4.试剂准备

1)   使用前所有试剂应置于室温平衡至少30分钟。

2)  本试剂盒可以直接加样,如浓度过高,可以进行适当比例的稀释(推荐2-5倍稀释),计算时应将结果乘以稀释的倍数。

3)  洗涤液为25倍浓缩液,使用前将所有洗涤液倒入500ml或1L的烧杯中,用双蒸水定容到500ml即为工作液。

4)  标准品的稀释:取5支干净的Eppendorf管,每管加150μl的标准品稀释液,分别标记上标准品1,标准品2,标准品3,标准品4,标准品5.取150μl标准品原液加入标记标准品1          的管中,混匀后同样取出150μl,加入下一管,以此类推直至***一管。零孔:直接加标准品/样品稀释液。(见下图)

稀释.jpg

       原液    标准品1  标准品2    标准品3    标准品4    标准品5


5)生物素抗原的稀释:抽取生物素抗原稀释液1ml到浓缩型生物素抗原中,漩涡混匀15秒至冻干粉完全溶解,然后将所有液体移入稀释液瓶中,再次漩涡混匀30秒即为生物素抗原工作液。

6)  亲和素-HRP的稀释:低速离心(使浓缩液全部沉到管底),将浓缩亲和素-HRP全部移入相应稀释液中然后漩涡混匀30秒即为亲和素-HRP工作液

5.详细操作程序

1) 使用前请先将试剂盒在室温下平衡半小时。

2) 空白孔不加样,只加显色剂A,B和终止液用于调零。

3)标准品孔:每孔加入稀释好的标准品50μl,零孔加入标准品/样品稀释液50μl,然后加入生物素抗原工作液50μl(零孔必须要做,并将其作为标曲的***一个点)

4)样品孔:加入样品50μl(推荐直接加样,浓度高可以用样品稀释液稀释2-5倍),然后加入生物素抗原工作液50μl。

5) 轻轻摇晃,盖上封板膜,37℃培养箱中孵育30min。

6) 将25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用。

7) ***次洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

8) 加入50μl亲和素-HRP到标准品孔和样品孔中,轻轻摇晃,盖上封板膜,37℃培养箱中孵育30min。

9)  第二次洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

10)  显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。

11)  终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色).

12)  测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。

13)  计算:根据浓度和OD值算出标准曲线的回归方程,建议用专用计算软件进行计算,推荐使用ELISAcalc进行计算,拟合模型选用logistic曲线(四参数)。




BPE10382    人Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)ELISA Kit    Human Collagen Type Ⅰ,Col Ⅰ ELISA Kit         4-640ng/ml
BPE20528    小鼠Ⅰ型胶原(Col Ⅰ) ELISA Kit    Mouse Collagen Type Ⅰ,Col ⅠELISA Kit      0.5-80ng/ml
BPE30413    大鼠Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)ELISA Kit    Rat Collagen Type Ⅰ,Col Ⅰ ELISA Kit            0.5-80ng/ml
BPE80185    兔子Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)ELISA Kit    rabbit Collagen Type Ⅰ,Col Ⅰ ELISA Kit        2-320ng/ml
BPE91167    犬Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)ELISA Kit    Canine Collagen Type Ⅰ,Col Ⅰ ELISA Kit          5-800ng/ml
BPE92167    牛Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)ELISA Kit    bovine Collagen Type Ⅰ,Col Ⅰ ELISA Kit          5-800ng/ml


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