原果胶含量测定试剂盒(微量法)

需自备的仪器和用品                                                   

天平、研钵、常温离心机、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、浓硫酸和蒸馏水。

试剂的组成和配制                                                       

提取液一：液体100mL×2瓶，4℃保存。

提取液二：液体100mL×1瓶，4℃保存。

标准品：液体1mL×1支，4℃保存。

试剂一：浓硫酸，自备。

试剂二：液体2mL×1支，4℃保存。

试剂三：液体3mL×1瓶，4℃避光保存。

样品处理                                                               

将组织样品捣碎，按照样品质量(g)和提取液一体积(mL)为1: 20的比列（建议取约0.05g样品，加入1mL提取液一），置于90℃恒温水浴锅中浸提30min，取出冷却后于5000g、 25℃离心10min，去掉上清，沉淀中再加入1mL提取液一重复操作一次，离心后去上清，沉淀中加入1mL提取液二，置于90℃恒温水浴锅中水解1h，取出冷却后于8000g、25℃离心15min，取上清液待测。

测定操作表                                                            

注意：空白管和标准管只需测定一次。

计算公式                                                              

a.       用微量石英比色皿测定的计算公式如下

原果胶含量(mg /g 鲜重)= (C标准×V标) ×△A2÷△A1÷(W÷V样总) = 0.25×△A2÷△A1÷W

C标准：标准品浓度，0.25mg/mL；V标：反应体系中加入标准品体积，0.02mL； V样总：加入提取液体积，1mL；W：样本鲜重，g。

b.       用96孔板测定的计算公式如下

原果胶含量(mg /g 鲜重)= (C标准×V标) ×△A2÷△A1÷(W÷V样总) =0.25×△A2÷△A1÷W

C标准：标准品浓度，0.25mg/mL；V标：反应体系中加入标准品体积，0.02mL； V样总：加入提取液体积，1mL； W：样本鲜重，g。

注意事项                                                             

1.       浓硫酸具有强腐蚀性，操作时需特别注意，90℃加热取出后冷却再打开盖子，以防液体飞溅烧伤。                                                          

2.       若吸光值超过1，可将样本提取液进行适当稀释再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。

3.       最低检出限为10μg/g。