乙醇微量检测说明书（重铬酸钾比色法

三、仪器与试剂

3.1 仪器

• 紫外-可见分光光度计

• 恒温水浴锅（控温±1℃）

• 微量移液器（10 μL、100 μL、1000 μL）

• 1.5 mL离心管、石英比色皿（1 cm光程）

3.2 试剂

• 重铬酸钾溶液（0.1 mol/L）：称取2.942 g K₂Cr₂O₇（AR级），溶于100 mL 5%硫酸溶液中。

• 乙醇标准溶液：

• 母液（1% v/v）：准确量取1 mL无水乙醇（99.9%），定容至100 mL超纯水。

• 稀释为梯度浓度：0.01%、0.05%、0.1%、0.3%、0.5%（v/v）。

• 浓硫酸（98%，AR级）

四、操作步骤

4.1 样本前处理

1. 液体样本：直接取10 μL样本（若乙醇浓度＞0.5%，需预先稀释）。

2. 含杂质样本（如血液）：

• 取100 μL样本，加入900 μL超纯水，涡旋混匀后离心（10,000 rpm，5 min），取上清液检测。

4.2 反应体系

操作流程：

1. 按上表依次加入各组分至离心管，立即涡旋混匀10秒。

2. 置于60℃水浴反应15分钟（避光）。

3. 冷却至室温后，取150 μL反应液转移至比色皿，以超纯水为空白对照。

4.3 吸光度测定

• 分光光度计设置：590 nm波长，记录吸光度值（A）。

五、结果计算

5.1 标准曲线绘制

• 线性方程：A = 4.6 × C（乙醇浓度，%） + 0.02（R² ≥ 0.998）

5.2 样本浓度计算

公式：

$${�}_{\text{样本}}(\mathrm{\%})=\frac{{�}_{\text{样本}}-0.02}{4.6}$$

若样本稀释，需乘以稀释倍数（例：血液样本稀释10倍，最终浓度=计算值×10）。

六、注意事项

1. 安全防护：

• 浓硫酸具强腐蚀性，操作时需戴耐酸手套、护目镜。

• 反应产生Cr(III)为有毒物质，废液需统一收集处理。

2. 关键控制点：

• 水浴温度与时间必须精确，避免过度氧化导致吸光度偏高。

• 反应后溶液需冷却至室温再测定，温度影响吸光度值。

3. 干扰排除：

• 若样本含其他还原性物质（如葡萄糖），需增设空白对照（不加重铬酸钾）