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豚鼠白介素10(IL-10)ELISA Kit/Guinea pig interleukin10,IL-10 ELISA Kit

BPE40037 Catalogue No.
48/96T
1380.00-2580.00
2-320pg/m
2pg/m
批间差:CV<12%
批内差:CV<10%

白细胞介素 10(IL-10)也称为细胞因子合成抑制因子 (CSIF),是一种多效性细胞因子,可以在多种类型细胞中发挥免疫抑制或免疫刺激的作用。IL-10 能通过下调单核细胞表面主要组织相容性抗原Ⅱ的表达,降低其抗原呈递作用,下调 T 淋巴细胞活性, 抑制炎性细胞的激活、迁移和粘附;同时,IL-10 也能抑制炎症因子的合成与释放,Rene 等发现,内源性与外源性 IL-10 均能在转录水平强烈抑制IL-1IL-6IL-8TNF-α、 GM-CSFG-CSF 的合成,从而起到抗炎的作用。


1.实验原理:

本试剂盒采用竞争法检测样本中白介素10   (Interleukin   10,IL-10)的含量。向预先包被了抗体的酶标孔中加入样本,再加入生物素标记的识别抗原,在37℃下孵育30min,两者与固相抗体竞争结合形成免疫复合物,经PBST洗涤除去未结合的生物素抗原,然后加入亲和素-HRP,在37℃下孵育30min,亲和素-HRP与生物素抗原结合,洗涤后结合的HRP催化TMB(四甲基联苯胺)成蓝色,随后在酸的作用下转化成黄色,在450nm波长下有吸收峰,吸光值与样本中抗原的浓度成负相关

2.试剂盒组成:

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

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说明书

1份

1份


封板膜

2片(48)

2片(96)


密封袋

1个

1个


酶标包被板

1×48

1×96

长期-20℃

标准品(冻干粉)

2支(定容至150μl)

2支(定容至150μl)

2-8℃

标准品/样品稀释液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃

生物素抗原(冻干粉)

1支(稀释到3ml)

1支(稀释到6ml)

长期-20℃

亲和素-HRP(浓缩液)

50μl(稀释到3ml)

100μl (稀释到6ml)

长期-20℃

生物素抗原稀释液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃

亲和素-HRP稀释液

2.95ml×1瓶

5.9ml×1瓶

2-8℃

显色剂A液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃

显色剂B液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃

终止液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃

浓缩洗涤液

(20ml*25倍)×1瓶

(20ml*25倍)×1瓶

2-8℃

备注:

1)   试剂盒中“标准品/样品稀释液”为超纯水(可用双蒸水替代),“终止液”为2M的H2SO4,洗涤液为含0.15%吐温-20的PBST,如不够可自行配制。

2) 不同公司的缓冲体系存在较大差异,请勿将本试剂盒的试剂与其他公司的试剂混用以免影响实验结果。

3)  浓缩洗涤液在低温下会有少量盐类析出,稍微加温后即会消失,不影响使用。

4)   浓缩生物素抗原和浓缩亲和素-HRP稀释前务必先离心同时应避免反复冻融

3.需要而未提供的试剂和器材

1)  37℃恒温箱。                                 2)  标准规格酶标仪。

3)  精密移液器及一次性吸头               4)  双蒸水或超纯水

5)  干净的试管或Eppendof管              6)  吸水纸

7)  自动洗板机或8道排枪                    8)  ELISA数据处理软件,推荐使用ELISACalc

       9)  500ml烧杯的和适当量程的量筒

4.试剂准备

1)   使用前所有试剂应置于室温平衡至少30分钟。

2)  本试剂盒可以直接加样,如浓度过高,可以进行适当比例的稀释(推荐2-5倍稀释),计算时应将结果乘以稀释的倍数。

3)  洗涤液为25倍浓缩液,使用前将所有洗涤液倒入500ml或1L的烧杯中,用双蒸水定容到500ml即为工作液。

4)  标准品的稀释:取5支干净的Eppendorf管,每管加150μl的标准品稀释液,分别标记上标准品1,标准品2,标准品3,标准品4,标准品5.取150μl标准品原液加入标记标准品1            的管中,混匀后同样取出150μl,加入下一管,以此类推直至***一管。零孔:直接加标准品/样品稀释液。(见下图)

稀释.jpg

       原液    标准品1  标准品2    标准品3    标准品4    标准品5


5)生物素抗原的稀释:抽取生物素抗原稀释液1ml到浓缩型生物素抗原中,漩涡混匀15秒至冻干粉完全溶解,然后将所有液体移入稀释液瓶中,再次漩涡混匀30秒即为生物素抗原工作液。

6)  亲和素-HRP的稀释:低速离心(使浓缩液全部沉到管底),将浓缩亲和素-HRP全部移入相应稀释液中然后漩涡混匀30秒即为亲和素-HRP工作液

5.详细操作程序

1) 使用前请先将试剂盒在室温下平衡半小时。

2) 空白孔不加样,只加显色剂A,B和终止液用于调零。

3)标准品孔:每孔加入稀释好的标准品50μl,零孔加入标准品/样品稀释液50μl,然后加入生物素抗原工作液50μl(零孔必须要做,并将其作为标曲的***一个点)

4)样品孔:加入样品50μl(推荐直接加样,浓度高可以用样品稀释液稀释2-5倍),然后加入生物素抗原工作液50μl。

5) 轻轻摇晃,盖上封板膜,37℃培养箱中孵育30min。

6) 将25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用。

7) ***次洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

8) 加入50μl亲和素-HRP到标准品孔和样品孔中,轻轻摇晃,盖上封板膜,37℃培养箱中孵育30min。

9)  第二次洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

10)  显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。

11)  终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色).

12)  测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。

13)  计算:根据浓度和OD值算出标准曲线的回归方程,建议用专用计算软件进行计算,推荐使用ELISAcalc进行计算,拟合模型选用logistic曲线(四参数)。



BPE10155    人白介素10(IL-10)ELISA KIT     Human Interleukin 10,IL-10 ELISA KIT                           4-640pg/ml
BPE20005    小鼠白介素10(interleukin 10,IL-10)ELISA KIT     Mouse interleukin 10,IL-10 ELISA KIT 2-320pg/ml
BPE30651    大鼠白介素10(IL-10)ELISA KIT     Rat Interleukin 10,IL-10 ELISA KIT                              2-320pg/ml
BPE40037    豚鼠白介素10(IL-10)ELISA Kit     Guinea pig interleukin10,IL-10 ELISA Kit                    2-320pg/m
BPE50120    猪白介素10(IL-10)ELISA Kit     Porcine interleukin 10,IL-10 ELISA Kit                            4-640pg/ml
BPE60095    鸡白介素10(IL-10)ELISA Kit     Chicken Interleukin 10,IL-10 ELISA KIT                          1.5-240pg/ml
BPE60827    鸭白细胞介素10(IL-10)ELISA kit    Duck Interleukin 10,IL-10 ELISA KIT                         1.5-240pg/ml
BPE80177    兔子白介素10(IL-10)ELISA Kit    Rabbit Interleukin 10,IL-10 ELISA Kit                           1.5-240pg/ml
BPE90130    鱼白介素10(IL-10)ELISA Kit    Fish Interleukin 10,IL-10 ELISA Kit                                  0.6-144pg/ml
BPE91159    犬白介素10(IL-10)ELISA Kit    Canine Interleukin 10,IL-10 ELISA Kit                              3-480pg/ml
BPE93049    羊白介素 -10 (IL-10) ELISA Kit     Goat Interleukin 10,IL-10 ELISA Kit                            4-640pg/ml
BPE92159    牛白介素10(IL-10)ELISA Kit    bovine Interleukin 10,IL-10 ELISA Kit                              4-640pg/ml

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