1.原理
以NAD+为氢受体,LDH催化乳酸脱氢产生丙酮酸,是NAD+转化成NADH。其中NBT的递氢是NBT还原为紫色呈色物,呈色物的吸光度在530nm时与乳酸含量成线性关系。
2.测定意义
乳酸是糖无氧氧化(糖酵解)的代谢产物。乳酸产生于骨胳,肌肉,脑和红细胞。经肝脏代谢后由肾分泌排泄。血乳酸测定可反映组织氧供和代谢状态以及灌注量不足。乳酸水平的增高可见于多种临床疾病。
3.测试所需仪器设备及自备试剂
可见光分光光度计,恒温水浴锅,离心机, 漩涡混匀器,精密移液器,试管,双蒸水。
4.适用范围
本试剂盒适合测定血清、血浆、组织等样本中D-乳酸(D-Lac)的含量
5.试剂及配置
试剂 | 50T | 100T |
试剂1 | 5ml*1瓶,用时定容到50ml | 10ml*1瓶,用时定容到100ml |
试剂2 | 显色剂*1支(-20℃保存),用时用10ml双蒸水稀释,现配现用 | 显色剂*1支(-20℃保存),用时用20ml双蒸水稀释,现配现用 |
试剂3 | 5ml*1瓶 | 10ml*1瓶 |
试剂4 | 酶冻干粉*1支,-20℃保存 | 酶冻干粉*1支,-20℃保存 |
试剂5 | 10ml*1瓶,用时稀释10倍 | 20ml*1瓶,用时稀释10倍 |
标准品(3mmol/L) | 100μl*1支 | 100μl*1支 |
6.样本处理
(1)血清、血浆:建议直接加样。
(2)组织匀浆液的制备:准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=1:9的比例加入9倍体积的生理盐水,冰水浴条件下,制备成10%的组织匀浆,2500转/分离心10分钟,取上清进行测定。
(3)细胞培养上清:建议直接加样。
7. 操作步骤
(1)混合试剂:
a. 50T:50ml试剂2应用液+10ml显色剂应用液+5ml试剂3+ 1支酶冻干粉,临用前混合
b. 100T:100ml试剂2应用液+20ml显色剂应用液+10ml试剂3+ 2支酶冻干粉,临用前混合
(2)反应
37℃预温5分钟
37℃孵育10分钟
混匀,1cm光径,双蒸水调零,530nm测定各管波长

(1)应取空腹或静止状态下的静脉血,并避免血液瘀滞,如用止血带,应在针头刺入静脉后马上放开。
(2)血液要新鲜,最好是当天完成,如果当天完不成,可将样本进行样本前处理后,将上清液4℃或-20℃保存,可稳定15~30天。
(3)蛋白沉淀剂如有结晶,则取上清进行实验。
(4)加入酶液后,试管勿剧烈摇动,避免泡沫形成以致位于溶液表层的酶变性。
(5)剧烈运动后,血中乳酸含量明显增高,可先进行预实验,确定样本合适的稀释比例。