测定意义:
S-PPO主要来源于土壤微生物、植物根系分泌物及动植物残体分解释放,催化土壤中芳香族化合物氧化成醌,醌与土壤中蛋白质、氨基酸、糖类、矿物等物质反应生成有机质和色素,完成土壤芳香族化合物循环,用于土壤环境修复。
测定原理:
S-PPO能够催化邻苯三酚产生紫色物质,后者在430nm有特征光吸收。
自备用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、乙醚100mL(不允许快递)、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:粉剂×2瓶,临用前每瓶加入15mL双蒸水,用不完的试剂仍4℃保存;
试剂二:液体10mL×1瓶,4℃保存;
试剂三:乙醚50mL×2瓶,4℃保存;(自备)
测定步骤:
试剂名称 | 测定管 |
风干土样(g) | 0.05 |
试剂一(μL) | 500 |
振荡混匀,30℃恒温培养1 h
振荡数次室温静置30min,用蒸馏水调零,取1mL上层液于430nm处测定吸光值。
S-PPO活力计算
标准条件下测定的回归方程为y = 8.97x -0.003;x为标准品浓度(mg/mL),y为OD值。
单位的定义:24h每g土样中产生1mg 紫色没食子素定义为一个酶活力单位。
S-PPO活力(U /g 土样)=(A+0.003) ÷8.97÷反应时间(1/24h)×反应总体积(2.45mL)÷样本质量(0.05g)=131×(A+0.003)