还原型谷胱甘肽（GSH）测定试剂盒

1.原理

在一定浓度的混浊菌液中，由于溶菌酶能水解细菌细胞壁上肽聚糖使细菌裂解而浓度降低，透光度增强，故可以根据透光度变化来推测溶菌酶的含量。

2.测定意义

谷胱甘肽（GSH）是一种低分子清除剂，它可清除O2-、H2O2、LOOH。谷胱甘肽是谷氨酸、甘氨酸和半胱氨酸组成的一种三肽，是组织中主要的非蛋白质的巯基化合物，并且是GSH—PX和GST两种酶类的底物，为这二种酶分解氢过氧化物所必需，它并且能稳定含巯基的酶和防止血红蛋白及其它辅因子受氧化损伤，最近还证明GSH也参与使维生素E恢复到还原态的作用，缺乏或耗竭GSH会促使许多化学物质或环境因素产生中毒作用或加重其中毒作用，这可能与增加氧化损伤有关，因而GSH的量的多少是衡量机体抗氧化能力大小的重要因素。

3.测试所需仪器设备及自备试剂

酶标仪（530nm）,恒温水浴锅,离心机, 漩涡混匀器，精密移液器。

4.试剂及配置

（1）贮备菌液的配制：取 5mg/支的菌粉 1 支，倒入匀浆管中，加菌粉溶剂 1ml，轻轻缓慢上下旋转研磨3 分钟（切勿溅出），即为贮备菌液，将其取出后置 2～8℃冰箱密封保存一周左右。

（2）应用菌液的配制：按贮备菌液:菌粉溶剂=1:19 进行配制，需多少配多少。剩下的应用菌液 2～8℃可保存一周左右。是现用现配，用时摇匀。

（3）标准品的配制：

①、标准品贮备液的配制：每支准确加双蒸水 1.0ml 配成 2mg/ml 的标准品贮备液。2～8℃可保存 7～10 天。

②标准品应用液的配制： 临用时按标准品贮备液∶双蒸水=1∶799 比例稀释成 2.5µg/ml（即 200U/ml）的标准品应用液，需多少配多少。2～8℃保存，可保存 7～10 天。 

5.样本处理

（1）血清（浆）：直接加样。

（2）组织匀浆液的制备：准确称取组织重量，按重量(g)：体积(ml)=1：9的比例加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下，制备成10%的组织匀浆，10000转/分冷冻离心30分钟，取上清，再用生理盐水稀释成最佳取样浓度。

6.操作步骤

（1）自身对照法测定溶菌酶 

（适用于样本数量较少，或者样本有混浊或有颜色，如血液红色） 

[注]：本法用分光光度计 530nm 处,1cm 光径比色皿测得是样本或标准的透光度值 

①、将配制好的应用菌液，标准应用液及所需检测的样本均放入 37℃水浴箱中预温 5 分钟 

以上。使菌液，标准液及检测样本的温度达到 37℃。 

②、将可见分光光度计于 530nm 处,1cm 光径比色皿,以双蒸水调透光度 100% (比色皿准备两

只,一只用于调透光度 100%,一只用于测定)。 

③、往相应编号的试管中加入 0.2ml 待测样本，取 2ml 应用菌液迅速冲入试管中，立即混

匀并计时。(标准品应用液取 0.2ml 双蒸水,加入 2ml 应用菌液,其它操作与测定相同) 。

④、迅速倒入比色皿中在可见分光光度计 530nm处比浊，5 秒时读取透光度值T0, 比色皿不

要取出，在 2 分 5 秒时读取透光度值T2。

[注]：如 5 秒时来不及读数，可 20 秒时读取调透光度值T0,在 2 分 20 秒时读取透光度值T2，标准管需同样操作。 

⑤、求出 2 次透光度的差值（△T= T2-T0）。

[注]：用同一比色皿每检测一个样本后均要用双蒸水冲洗干净，才可再放第二个样本或标准品应用液。

（2）空白对照法（适合澄清，不带颜色的样本）

37℃准确水浴 15 分钟，立即取出置于 0℃以下的冰水浴中 3 分钟，逐管取出，倒入 1cm光径比色皿中，530nm处，双蒸水调透光度 100%，比色，测各管透光度T15（T15即 37℃水浴 15分钟后的透光度值）。