1.原理
游离脂肪酸在脂酰辅酶A合成酶作用下生成脂酰辅酶A,脂酰辅酶A在脂酰辅酶A氧化酶作用下生产烯酰辅酶A和过氧化氢,过氧化氢在过氧化物酶催化下与4-氨基替比林显色,呈色物在546nm处有吸收峰,以此反应游离脂肪酸的含量。
2.测定意义
FFA既是脂肪水解的产物,又是脂肪合成的底物。FFA的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关,也可反映食物贮藏中的品质变化。
3.测试所需仪器设备及自备试剂
可见光分光光度计(435nm),恒温水浴锅,离心机, 漩涡混匀器,精密移液器,试管,浓硫酸,蒸馏水。
4.适用范围
本试剂盒可测定动物血清(浆)等样本中游离脂肪酸(NEFA)的含量。
5.试剂及配置
试剂 | 100T |
试剂1 | 100ml*1瓶 |
试剂2 | 100ml*1瓶 |
试剂3 | 终止液,100ml*1瓶 |
fHb标准贮存液(1g/L) | 1ml*1支,用时以试剂4将贮存液稀释10倍,即为标准品工作液(100mg/L),4℃保存一周。 |
试剂4 | 5ml*1瓶,为标准品稀释液 |
6.样本处理
血浆样本直接加样
7. 操作步骤
试剂(ml) | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
标准品 |
| 0.02 |
|
待测样本 |
|
| 0.02 |
试剂1 | 1 | 1 | 1 |
试剂2 | 1 | 1 | 1 |
迅速摇匀,37℃孵育10min
混匀,在435nm处,光径1cm,空白管调零,10min以内测定各管吸光值
(1)空白管和标准管只要测一次。
(2)采样及分离血浆时不得发生溶血。
(3)测试样本浓度过大是应先用生理盐水稀释样本然后再检测