总蛋白含量测定试剂盒（BCA法）

1.原理

BCA检测法是Lowry测定法的一种改进方法。与Lowry方法相比，BCA法的操作更简单，试剂更加稳定，几乎没有干扰物质的影响，灵敏度更高（微量检测可达到0.5μg/ml），应用更加灵活。
蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与Cu²⁺络合生成络合物，同时将Cu²⁺还原成Cu⁺。二喹啉甲酸及其钠盐是一种溶于水的化合物，在碱性条件下，可以和Cu⁺结合生成深紫色的化合物，这种稳定的化合物在562nm处具有强吸收值，并且化合物颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。故可用比色的方法确定蛋白质的含量。
2.测定意义

样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。

3.测试所需仪器设备及自备试剂

可见光分光光度计（562nm）,恒温水浴锅,离心机, 漩涡混匀器，精密移液器，试管。

4.适用范围

本试剂盒可测定动物血清（浆）、组织等样本的总蛋白含量。

5.试剂及配置

BCA工作液的配置：将1ml试剂B完全倒入试剂A瓶中，充分混匀，即为BCA工作液。

6.样本处理

（1）组织：按照组织质量（g）：PBS体积(mL)为1：9的比例（建议称取约0.1g组织，加入0.9mL PBS）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清液待测。

（2）血清等液体：建议血清（浆）：PBS=1:49进行稀释。 

（3）其他液体样品：按比例稀释，测定范围为20-2000μg/ml，（不同的样本稀释度不一样），请在批量测试前先做1-2个样本的预实验

7.操作步骤

(1)试管法：

漩涡混匀，37℃孵育30min，然后冷却至室温，于562nm处，1cm光径，蒸馏水调零，测定各管吸光值（10min内测完）

（2）微板法：

轻轻摇晃混匀，37℃孵育30min，然后冷却至室温，酶标仪562nm，空白孔调零，测定各孔吸光值（10min内测完）