碱性磷酸酶（ALP）测定试剂盒（4-NPP法）
- 50/100T
- 200.00/350.00
- 碱性磷酸酶（ALP）
- 批间差：CV<10%
- 批内差：CV<8%
碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌的细胞膜。
1.原理
对硝基苯酚磷酸酯（4-NPP）在碱性磷酸酶（ALP）的作用下生产产物对硝基苯酚（4-NP），在401nm处有吸收峰，以此反应碱性磷酸酶（ALP）的活性。
2.测定意义
碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌的细胞膜。
3.测试所需仪器设备及自备试剂
可见光分光光度计,恒温水浴锅,离心机,漩涡混匀器，精密移液器，试管，双蒸水。
4.适用范围
本试剂盒可测定动物血清（浆）、组织等样本中过氧化物酶（POD）的活性。
5.试剂及配置
试剂 | 50T |
试剂1 | 40ml*1瓶 |
试剂2 | 粉剂*1支，用时以双蒸水溶解并稀释至40ml，4℃下可保存一周 |
试剂3 | 终止液，40ml*1瓶 |
标准品原液 | 对硝基苯酚（1mmol/L），0.5ml*1支 |
6.样本处理
（1）组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清液待测。
（2）血清等液体：直接测定。
7.操作步骤
（1）标准品的配置：
配置方法 | 对应活力（U/L) | |
S1 | 10μl原液+990μl试剂3 | 61 |
S2 | 20μl原液+980μl试剂3 | 122 |
S2 | 30μl原液+970μl试剂3 | 183 |
S4 | 40μl原液+960μl试剂3 | 244 |
S5 | 50μl原液+950μl试剂3 | 305 |
（2）基质液的配置：将试剂1和溶解后的试剂2等量混合，用多少配多少，现配现用。
（3）反应
试剂（ml） | 空白管 | 测定管 | 标准管 |
基质液 | 1.25 | 1.25 | 1.25 |
待测样本 | 0.025 | ||
配置好的标准品（S1-S5） | 0.025 |
混匀，在37℃孵育10min
试剂3 | 0.25 | 0.25 | 0.25 |
待测样本 | 0.025 |
混匀，401nm处，1cm光径，空白管调零，10min内测定各管吸光值。
