乙酰胆碱酯酶（AChE）测定试剂盒（分光光度法）

1.原理

AchE催化Ach水解生成胆碱，胆碱与二硫对硝基苯甲酸（DTNB）作用生成5-巯基-硝基苯甲酸（TNB）；TNB在412nm处有吸收峰，通过测定412 nm吸光度增加速率，计算AchE活性。

2. 测定意义

AchE属于丝氨酸水解酶，广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE催化乙酰胆碱（Ach）水解，在神经传导调节中起重要作用。

3. 测试所需仪器设备及自备试剂:

可见光分光光度计,恒温水浴锅,离心机, 漩涡混匀器，精密移液器，试管，双蒸水。

4.适用范围：

本试剂盒可测定动物血细胞等样本中乙酰胆碱酯酶（AChE）的活性。

5.试剂及配置

6. 操作步骤

（1）红细胞洗涤：

取EDTA或肝素钠抗凝全血2-4ml至于带刻度离心管中，以500-1000r/min，离心5-10min，弃上清留沉淀的红细胞，然后用生理盐水洗涤2-3次。

（2）溶血液的制备：

①取压积红细胞10μl加冷双蒸水1ml，用手剧烈震摇数分钟，或漩涡混匀器充分混匀1min制得溶血液。摇匀溶血后加入1ml试剂7（相当于溶血液稀释201倍）混匀。取0.1ml该溶血液加入2.9ml试剂8，摇匀，2min后蒸馏水调零，1cm光径，412nm波长比色。按下式计算0.1ml红细胞溶血液中Hb的含量（g）

0.1ml红细胞溶血液中Hb的含量（g）=OD*÷=OD*39.5*10^-4

      注：4.9*10⁵是Hb的摩尔消光系数，64454为Hb的分子量

（2）显色

37℃水浴15min

混匀，412nm，光径1cm，蒸馏水调零，测定各管吸光值