1.原理
本试剂盒根据血清脂肪酶水解乳剂基质生成甘油的原理,利用Hantzsch反应测定甘油的含量,以此反映脂肪酶活力的高低。
2.测定意义
脂肪酶(LPS) 又称甘油酯水解酶, 催化甘油三酯,水解生成脂肪酸和甘油。脂肪酶广泛存在于各种生物中。血清中LPS的异常增高胰腺炎和胰腺癌。
3.测试所需仪器设备及自备试剂
可见光分光光度计,恒温水浴锅,离心机, 漩涡混匀器,精密移液器,试管,无水乙醇。
4.适用范围
本试剂盒可测定动物血清、血浆、组织以及培养细胞、培养上清液、脑积液等样本中的脂肪酶(LPS)活力。
5.试剂及配置
试剂 | 50T | 100T |
试剂1: | 试剂1为乳剂基质,25ml*1瓶 | 试剂1为乳剂基质,50ml*1瓶 |
试剂2 | 12.5ml*1瓶 | 25ml*1瓶 |
试剂3 | 0.2ml*1支,用时加入100ml无水乙醇中混匀 | 0.2ml*2支,用时加入200ml无水乙醇中混匀 |
标准品(1μmol/ml) | 200μl*1支 | 200μl*1支 |
6.样本处理
(1)血清(浆):建议直接加样
(2)组织匀浆液的制备:准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=1:9的比例加入9倍体积的生理盐水,冰水浴条件下,制备成10%的组织匀浆,2500转/分离心10分钟,取上清,再用生理盐水稀释成最佳取样浓度。
(3)细胞培养上清:建议直接加样。
7. 操作步骤
| 标准管 | 测定管 | 对照管 | 空白管 |
试剂1(ml) | 0.25 | 0.25 | 0.25 | 0.25 |
37℃预热5分钟
代测样本(ml) |
| 0.025 |
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双蒸水(ml) |
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| 0.025 |
标准品(ml) | 0.025 |
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混匀,37℃孵育10分钟
试剂2(ml) | 0.25 | 0.25 | 0.25 | 0.25 |
试剂3(ml) | 2 | 2 | 2 | 2 |
代测样本(ml) |
|
| 0.025 |
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混匀,65℃水浴15分钟,然后流水冷却,3000r/min离心5min,取上清液,420nm波长,1cm光径,空白管调零,测定各管吸光值
(1)脂肪酶比较稳定,因此标本置于冰箱内可保存数日。标本长期保存可至于-80℃
(2)血红蛋白可抑制脂肪酶的活力,故严重溶血的标本不宜采用
(3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。