1.原理
过氧化氢酶(CAT)分解H2O2的反应可通过加入钼酸铵而迅速中止,剩余的H2O2与钼酸铵作用产生一种淡黄色的络合物,在405nm处测定其变化量,可计算出过氧化氢酶的活力。
2.测定意义
过氧化氢酶能迅速分解细胞代谢中产生的毒性物质过氧化氢,是一种体内的抗氧化酶。在临床检验上,过氧化氢酶的升高对某些疾病可能是有用的诊断工具。此外,检测该酶对抗衰老、肿瘤发病机制及自由基代谢失衡研究等也具有一定意义。
3.测试所需仪器设备及自备试剂
可见光分光光度计,恒温水浴锅,离心机, 漩涡混匀器,精密移液器。
4.试剂及配置
试剂 | 50T | 100T |
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试剂1: | 50ml*1瓶,直接使用 | 100ml*1瓶,直接使用 |
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试剂2 | 粉剂*1瓶,试剂2用试剂3溶解,成为显色液,(如果底部有不溶粉末沉淀,直接取上清使用,不影响测定结果) | 粉剂*1瓶,试剂2用试剂3溶解,成为显色液,(如果底部有不溶粉末沉淀,直接取上清使用,不影响测定结果) |
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试剂3 | 50ml*1瓶,用于溶解试剂2 | 100 ml *1瓶,用于溶解试剂2 |
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试剂4 | 1.5ml*1瓶 | 3ml*1瓶 |
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5.样本处理
(1)血清(浆):直接加样。
(2)组织匀浆液的制备:准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=1:9的比例加入9倍体积的生理盐水,冰水浴条件下,制备成10%的组织匀浆,2500转/分离心10分钟,取上清,再用生理盐水稀释成最佳取样浓度。
6.操作步骤
试剂 | 空白管B1 | 空白管B2 | 测定管 |
试剂1(ml) | 1 | 1 | 1 |
试剂1在37℃水浴5min
37℃准确水浴1min
混匀,10分钟后波长405nm,光径0.5cm,双蒸水调零,测定各管吸光度值
注:一般样本没有高脂等导致显著差异情况,对照管的样本更换成双蒸水,做1-2管对照即可。如需做样本自身对照,则试剂盒所测定样本数量减至48样。