本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中植物乙烯(E)的水平。向预先包被了植物乙烯(E)单克隆抗体的酶标孔中加入乙烯(E)，加入生物素标记的抗E抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中植物乙烯(E)的浓度呈正相关。
试剂盒组成：
1 | 标准品（160nmol/L） | 0.5ml | 7 | 显色剂A液 | 3ml |
2 | 标准品稀释液 | 3ml | 8 | 显色剂B液 | 3ml |
3 | 酶标包被板 | 12孔×4条 | 9 | 终止液 | 3ml |
4 | 链霉亲和素-HRP | 3ml | 10 | 说明书 | 1份 |
5 | 30倍浓缩洗涤液 | 20ml | 11 | 封板膜 | 2张 |
6 | 生物素标记的抗- E抗体 | 1ml | 12 | 密封袋 | 1个 |
需要而未提供的试剂和器材：
1. 37℃恒温箱。
2. 标准规格酶标仪。
3. 精密移液器及一次性吸头
4. 蒸馏水
5. 一次性试管
6. 吸水纸等
样本处理：
1) 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于－20℃保存，但应避免反复冻融。
2) 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转／分）。仔细收集上清，检测前如有沉淀，应再次离心。
3) 血浆：应根据检测指标的要求选择EDTA或枸橼酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转／分）。仔细收集上请，检测前如有沉淀，应再次离心。
4) 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
5) 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
6) 组织标本：切割标本后，称取重量（1g）,加入一定量(9ml)的PBS(PH7.4)。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。样本不足1g,按照1：9加入PBS后匀浆即可。
标本要求：
1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
注意事项：
1．从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
3．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
4．为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
5．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
6．底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
洗板方法：
手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
操作程序：
1．标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）：
80nmol/L | （5号标准品） | 120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液 |
40nmol/L | （4号标准品） | 120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液 |
20nmol/L | （3号标准品） | 120μl的4号标准品加入120μl的标准品稀释液 |
10nmol/L | （2号标准品） | 120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液 |
5nmol/L | （1号标准品） | 120μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液 |
2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3．加样：1）空白孔：空白对照孔不加样品，生物素标记的抗E抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂A&B和终止液，其余各步操作相同；2）标准品孔：加入标准品50μl，链霉素-HRP50μl（标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加）；3)待测样品孔:加入样本40μl，然后各加入抗- E抗体10μl、链酶亲和素-HRP50μl，盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育60分钟。
4．配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5．洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6．显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。
7．终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
8．测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。
9.根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。
BPE94006 植物乙烯(ETH) ELISA Kit Plant Ethylene,ETH elisa 0.5-80nmol/L
